正品血竭
1.1动物
SD雄性大鼠只，体质量(±20)g，由南京医科大学提供，动物许可证号:SCXK(苏)-，动物合格证号:14450。
1.2试剂龙血通络胶囊，江苏康缘药业股份有限公司生产，批号:91303，规格:0.33g/粒(含龙血竭酚类提取物0.30g)。尼莫地平注射液(nimodipine)，规格:4mg/20mL。超氧化物歧化酶(SOD)试剂盒，批号:1124;谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)试剂盒，批号:1124;乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒，批号:1124;丙二醛(MDA)试剂盒，批号:1124;诱导型一氧化氮合酶(iNOS)试剂盒，批号:1205;一氧化氮(NO)试剂盒，批号:1205，由南京建成生物工程研究所提供。
1.3模型制备与检测指标1.3.1大鼠双侧颈总动脉结扎实验将60只雄性SD大鼠随机分为6组，分别设为假手术组、脑缺血模型组、尼莫地平注射液组(0.01g/kg)及龙血通络胶囊高、中、低剂量组(0.66、0.33、0.17g/kg，按总酚计算分别为0.6、0.3、0.15g/kg)，每组10只，将各组大鼠腹腔注射10%水合氯醛mg/kg进行麻醉，并仰卧位固定于大鼠板上，颈正中切口，用眼科剪钝性分离双侧颈总动脉(CCA)与迷走神经，手术线结扎双侧CCA(不结扎迷走神经)，假手术组仅暴露而不结扎CCA。术后各组大鼠分别灌胃给予相应药物，阳性组腹腔注射尼莫地平注射液，1次/d，连续5d，假手术组及模型组给予等体积的生理盐水(NS)。末次给药后1h脱颈处死大鼠，取右侧大脑并称取湿重后，置于70℃干燥箱中干燥，称取干重并计算脑组织含水量。脑含水量=(脑湿重－脑干重)/脑湿重×%。将每只大鼠剩余的左侧脑组织，用10%甲醛固定，HE染色，制成病理切片观察脑组织中病理改变情况。1.3.2大鼠局灶性脑缺血/再灌注实验将SD雄性大鼠96只随机分为6组，分别设假手术组、脑缺血模型组(NS)、尼莫地平注射液对照组(0.01g/kg)及龙血通络胶囊高、中、低剂量组(0.66、0.33、0.17g/kg，按总酚计算分别为0.6、0.3、0.15g/kg)，每组16只，各组大鼠分别灌胃给予相应药物，1次/d，连续7d，阳性组腹腔注射尼莫地平注射液，1次/d，连续3d，假手术组及模型组给予等体积的NS，末次给药后1h开始造模。将各组大鼠腹腔注射10%水合氯醛mg/kg进行麻醉，并仰卧位固定于大鼠板上，颈正中切口，分离左侧的CCA、颈外动脉(ECA)以及颈内动脉(ICA)。于ECA始端约2mm处剪开0.2mm小口，从ECA小口将栓塞线插入，缓慢推动栓塞线尾部，由ICA经CCA分叉处将线缓慢向ICA入颅的方向推动16～20mm，遇阻力时即停止，阻断大脑中动脉，记录时间。阻断2h后缓慢拉出栓塞线，使ICA内血流与CCA再次相通，术后大鼠对侧肢体运动发生障碍即为模型制备成功，将每组符合模型要求的合格大鼠随机抽取进行后续实验。假手术组只分离和暴露ICA、CCA、ECA，并不阻断大脑中动脉。手术时室温控制在23～25℃，大鼠肛温维持在37℃左右。1.3.3大鼠神经功能评分大鼠在建立脑缺血/再灌注模型24h后，每组抽取合格大鼠10只，按照ZeaLonga以及Bedcrson五级评分法对其进行神经功能学评分。0分，动物活动正常，未出现明显的神经功能缺陷症状;1分，提尾悬空时，动物的手术对侧前肢表现为腕肘屈曲肩内旋，肘外展，紧贴胸壁;2分，爬行时出现向手术对侧转圈者;3分，动物行走时向手术对侧偏瘫方向倾倒者;4分，意识丧失，不能自行行走者。1.3.4脑组织匀浆生化指标的测定所有大鼠断头处死，在冰盒上快速取大脑，去除小脑，将脑部从大脑纵裂处切开。左半脑称重，并按1∶9(w/v)加入冰冷生理盐水，用可调高速匀浆机制成10%脑组织匀浆液，以r/min离心15min，用移液枪取上清液，并按购买试剂盒说明书中方法测定SOD、GSH-Px、LDH、iNOS活性以及MDA、NO的含量。1.4统计学方法所有实验数据采用均数±标准差(x±s)表示，组间分析用t检验，均采用SPSS13.0软件进行统计学分析，P＜0.05表示差异有统计学意义。
1.龙血通络胶囊对大鼠脑缺血后脑中含水量的影响如Tab.1所示，脑缺血模型组与假手术组比较，大鼠脑含水量明显增多，而与模型组比较，龙血通络胶囊高、中剂量组可显著降低由于脑缺血升高的脑含水量，低剂量组作用效果不明显。病理学改变如Fig.1所示:假手术组中大鼠的脑海马区神经胶质细胞及神经细胞呈正常状态，神经元细胞胞质丰富，排列整齐，核仁明显，细胞结构完整;而在脑缺血模型组的大鼠脑海马区中神经胶质细胞淡染且缩小，部分细胞出现固缩，核体不规则，并见明显转化灶形成，此外，神经元细胞可见溶解及水肿出现，细胞核染色较模糊;而龙血通络胶囊高、中剂量组及尼莫地平注射液组与脑缺血模型组比较明显减轻了上述病理学改变状态，仅有少量神经胶质细胞出现萎缩及淡染现象，转化灶明显减少;低剂量组大鼠脑海马区神经细胞水肿和溶解状况造成胞浆与胞核分界模糊不清，神经胶质细胞出现固缩及淡染状况也无明显减少。2.龙血通络胶囊对大鼠神经功能学评分的影响实验结果如Tab.2所示，除假手术组各大鼠活动正常，未见明显的神经功能缺陷症状外，其余各组大鼠在脑缺血术后均出现不同程度的行为异常，主要表现为患侧肢体屈曲，爬行时向患侧转圈或倾倒并伴随追尾运动等。与脑缺血模型组大鼠比较，龙血通络胶囊高、中剂量组及尼莫地平注射液组可显著降低大鼠神经功能评分，而低剂量组的作用不明显。
3.龙血通络胶囊对大鼠脑组织匀浆中各生化指标的影响实验结果如Tab.3-5所示，当建立大鼠局灶性脑缺血再灌注模型后，与假手术组比较，大鼠脑组织匀浆中SOD、GSH-Px、LDH、iNOS活性以及NO含量明显下降，MDA含量则明显升高。同时，尼莫地平注射液组和龙血通络胶囊高、中剂量组可明显增强SOD、iNOS的活性以及抑制LDH活性的下降，且龙血通络胶囊高剂量组可明显升高GSH-Px的活性，尼莫地平注射液组和龙血通络胶囊高、中剂量组可降低大鼠脑组织中MDA的含量，低剂量组作用效果不明显。
龙血竭是一种传统名贵中药，具有抗炎、抗氧化、抗血小板聚集、保护心肌细胞、降低一氧化氮合酶(NOS)活性等多种药理学作用。龙血通络胶囊是从龙血竭中提取得到的酚类提取物，其有效成分主要为龙血竭总黄酮。已有研究表明，龙血竭总黄酮对大鼠心肌缺血损伤有明显的保护作用，但在脑缺血方面研究甚少。本研究结果显示龙血通络胶囊高、中剂量组能明显抑制大鼠脑缺血后的脑水肿程度，降低大鼠局灶性脑缺血后的行为学障碍评分，神经功能损伤症状;对缺血引起的脑组织病理学改变也有显著的改善作用，表明龙血通络胶囊对大鼠脑缺血性损伤有较好的保护作用。当脑缺血发生时，由于大脑内氧和葡萄糖含量不足，致使细胞内的离子平衡发生紊乱，进而导致一系列的连锁反应从而引起了细胞程序性死亡，这其中就包括细胞内的氧化反应和硝化应激、兴奋性增强、炎症以及细胞凋亡。神经细胞对自由基尤其敏感，脑缺血后可通过刺激细胞膜磷脂分解，生成大量的自由基，同时由于脑内血管再通或侧支循环建立，组织对氧的利用率低于血液内提供的氧，相对过剩的氧会产生大量的超氧阴离子，从而对神经细胞产生损伤。SOD是一种源于生命体的活性物质，可清除人体内过多的有害氧自由基，其活力在一定程度上可反映内源性氧自由基的清除能力;GSH-Px是机体内另一种重要的抗氧化酶，其主要作用是清除脂类氢过氧化物，减少过氧化脂(LPO)的生成以保护机体免受损害;大量的氧自由基作用于细胞膜上的不饱和脂肪酸可使膜脂质产生过氧化反应，产生脂质过氧化物MDA，其含量高低可直接反应组织过氧化程度;脑缺血后，脑细胞受损会引起细胞膜通透性增加，细胞内LDH外渗，从而导致脑组织内LDH含量降低。本研究结果显示，龙血通络胶囊高、中剂量组可明显升高脑缺血模型脑组织中的SOD、GSH-Px、LDH的水平以及降低MDA的含量，表明龙血通络胶囊对大鼠脑缺血性损伤的保护作用可能与其抗氧化作用有关。
NO是一种具有很强的神经毒作用的自由基，主要与调节脑内局部血流量和血管内皮细胞的抗黏附功能有关。iNOS为NOS的一种亚型，其活性改变直接调节NO生成量及生物学效应，广泛存在于各种神经胶质细胞、浸润的巨噬细胞以及中性粒细胞中，其催化产生的NO可直接或者间接通过其衍生物导致能量耗竭，进而损害DNA结构及合成，并诱导细胞程序性的死亡。此外，酸性细胞间隙可摄取NO代谢的一些终产物并再次通过歧化作用转化为NO，使其介导的损伤作用不断循环放大并持续，从而引发晚期的神经损伤。此外，也有研究表明，龙血竭的乙醇提取物可通过显著降低由脂多糖(LPS)刺激产生的TNF-α、NO、PGE2和IL-1β表达水平，改变NF-κB通路中p65基因活性进而降低iNOS的产生，最终抑制细胞内NO和PGE2等信号因子的释放，从而产生抗脑缺血损伤作用。本实验结果显示龙血通络胶囊高、中剂量对大鼠脑缺血损伤引起的NO含量和iNOS活性异常升高也具有明显抑制作用。
综上所述，龙血通络胶囊对脑缺血性损伤有较好的保护作用，其保护作用可能与其抗氧化和抑制NO产生及抗NO神经毒作用有关。
中国临床药理学与治疗学
年第11卷第22期
李睿，罗胜勇安徽省医学科学研究院安徽省自然科学基金(8085MH)连翘参考文献
［1］NamjoyanF，KiashiF，MoosaviZB，etal．EfficacyofDragon＇sbloodcreamonwoundhealing:Arandomized，double-blind，placebo-controlledclinicaltrial［J］．JTraditComplementMed，，6(1):37-40．
［2］方伟蓉，李运曼，邓嘉元．龙血竭总黄酮对动物心肌缺血的保护作用［J］．中国临床药理学与治疗学，，10(9):-．［3］邹毅清，蔡志扬，李小宝，等．红景天苷预处理对大鼠全脑缺血再灌注后炎症反应的影响［J］．现代中西医结合杂志，，31(6):-．［4］曹泽标，周小青，刘旺华．丹龙醒脑方对脑缺血再灌注损伤大鼠SVZ区Frizzled3、Dsh1及β-catenin表达的影响与促进神经干细胞增殖的机制［J］．中华中医药杂志，，31(10):-．［5］樊开宇，王冰，梅骁乐，等．滁菊总黄酮对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用［J］．中国临床药理学与治疗学，，22(1):9-12．［6］ＲanY，WangＲ，GaoQ，etal．Dragon＇sbloodanditsextractsattenuateradiation-inducedoxidativestressinmice［J］．JＲadiatＲes，，55(4):-．［7］邓嘉元，李运曼，方伟蓉，等．龙血竭总黄酮对乳鼠损伤心肌细胞的保护作用［J］．中国天然药物，，4(5):-．［8］孔婧，陈婷，王爽，等．活血通络清脑饮对老年短暂性脑缺血发作患者脑血流动力及纤维蛋白原的影响［J］．长春中医药大学学报，，32(2):-．［9］陈春光，贾洪丽，吕首旭．苦碟子注射液对大鼠急性脑缺血-再灌注损伤的保护作用［J］．中国临床药理学杂志，，28(3):-．［10］王欣，施蝉宏，毛蓉嫣．依达拉奉对老年短暂性脑缺血发作患者血清超氧化物歧化酶和丙二醛的影响［J］．中华老年医学杂志，，34(12):-．［11］刘金莹，唐燕，王洪鑫，等．利脑心胶囊对局灶性脑缺血模型大鼠血浆和脑组织中SOD、MDA含量的影响［J］．长春中医药大学学报，，28(3):-．［12］王梅，胡晓彤，戚大石，等．脑缺血/再灌注通过神经性一氧化氮合酶诱导KA受体亚基GluＲ6巯基亚硝基化的研究［J］．中国当代医药，，9(27):-．［13］ChangY，ChangTC，LeeJJ．Sanguisdraconis，adragon＇sbloodresin，attenuateshighglucose-inducedoxidativestressandendothelialdysfunctioninhumanumbilicaleinendothelialcells［J］．ScientificWorldJ，，:1-10．申明：本文仅用于专业医学人士学术讨论与交流目的，在任何情况下均不构成医疗处方、诊断意见或治疗方案。康缘尤赛金对与本文有关的任何纠纷不负有任何责任。
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